一、 仪器介绍

实验目的：

本试验检测受试物是否引起培养的哺乳动物细胞染色体畸变,以评价受试物致突变的可能性

实验概述：

在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂如秋水仙素或秋水仙胺处理,使细胞停止在中期分裂相,随后收获细胞,制片,染色,分析染色体畸变。

大部分的致突变剂导致染色单体型畸变,偶有染色体型畸变发生。虽然多倍体的增加可能预示着有染色体数目畸变的可能,但本方法并不适合用于测定染色体的数目畸变。

应用范围

应用于科研、农业、卫生、教育、雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域

符合标准：

GB/T 15670.19-2017《农药登记毒理学试验方法第19部分:体外哺乳动物细胞染色体

畸变试验》

二、试验流程

1细胞培养

选择合适细胞系，在含血清培养基中培养至对数生长期。

2受试物处理

设置多个浓度组需包括细胞毒性评估，如50%生长抑制浓度

阳性对照如丝裂霉素C、环磷酰胺等已知诱变剂

阴性对照溶剂对照

3.代谢活化系统S9混合液

模拟体内代谢，用于检测需代谢激活的致突变物如加Aroclor 1254诱导的大鼠肝S9

4.采样时间

短期处理:1个细胞周期通常24小时，含或不含S9

长期处理:覆盖多个细胞周期如48小时

5染色体制备

秋水仙素或秋水仙胺处理:阻断中期细胞。

低渗处理KCI溶液使细胞膨胀。

固定甲醇:冰醋酸=3:1后滴片，Giemsa染色。

6镜检分析

显微镜下观察至少200个中期分裂相，记录畸变类型和频率。

三、仪器与试剂

关键仪器：

培养箱、生物安全柜、离心机、显微镜配备油镜和图像分析系统

染色体自动扫描仪可选

主要试剂:

细胞培养基、胎牛血清、胰蛋白酶。

秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。